開發(fā)一種結(jié)合兩步雙水相萃取和親和吸附分離的新型集成化方法,用于從辣根中分離和純化辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)。首先,將兩步雙水相萃取工藝用于糖和色素的分離,然后將“多價(jià)”苯硼酸親和磁性石墨烯復(fù)合材料(d-PBA-GO@Fe3O4@PEI)用作進(jìn)一步吸附分離,實(shí)現(xiàn)從雜質(zhì)蛋白中選擇性分離HRP。通過研究溫敏聚合物17R4-鹽雙水相體系的液液相平衡行為,以及9 種模型化合物在雙水相體系中的分配行為,最終確定8% 17R4-13.2% (NH4)2SO4雙水相體系作為初步純化的工藝體系。通過構(gòu)建的集成化方法,成功地從辣根中分離出HRP,而對HRP的結(jié)構(gòu)沒有影響,HRP的比活力和純化因子分別達(dá)到28.93 U/mg和1.92。該方法具有優(yōu)異的分離純化性能,對植物糖蛋白的工業(yè)化生產(chǎn)具有良好的前景。
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