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苦蕎過敏原TBa 的表位突變及免疫活性鑒定
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 159 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 任曉霞,張 昕,崔曉東,李玉英,王轉(zhuǎn)花
關(guān)鍵詞: 苦蕎|過敏原|定點(diǎn)突變|免疫活性
摘要:

前期研究曾分離獲得一種純度均一的天然苦蕎過敏蛋白(tartary buckwheat allergen a,TBa ),免疫檢測發(fā)現(xiàn)其為苦蕎中的主要過敏原。本實驗采用定點(diǎn)突變的方法對得分較高的表位E1 的基因進(jìn)行分子改造,構(gòu)建5 個突變體L39R、L42R、L47R、V52R、L54R。在大腸桿菌BL21 中分別進(jìn)行表達(dá),經(jīng)Ni2+-NTA 親和純化后得到純度較高的重組突變體蛋白。ELISA 和點(diǎn)雜交檢測發(fā)現(xiàn),與突變前的E1 相比,突變體L42R、L47R、L54R 的免疫活性明顯降低,這表明Leu42、Leu47、Leu54 在TBa 的過敏性中起著至關(guān)重要的作用。

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