為探究氨基酸對(duì)植物乳桿菌生長及細(xì)菌素合成的影響,調(diào)節(jié)化學(xué)成分確定培養(yǎng)基中的氨基酸組成,培養(yǎng)植物乳桿菌KLDS1.0391,采用高效液相色譜法測(cè)定乳酸含量,通過實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)分析細(xì)菌素和氨基酸合成相關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)果表明,天冬氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、天冬酰胺及谷氨酰胺的缺失導(dǎo)致該菌生長能力和細(xì)菌素合成量均顯著降低(P<0.05);谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、絲氨酸、色氨酸及纈氨酸的缺失僅影響菌體生長,對(duì)細(xì)菌素合成無明顯影響;而賴氨酸脅迫(缺失及過量)對(duì)菌體的生長影響很小,但卻顯著影響細(xì)菌素的合成。色譜結(jié)果顯示,賴氨酸、酪氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、脯氨酸及蘇氨酸單缺失后乳酸含量升高。real-time PCR結(jié)果表明,細(xì)菌素合成相關(guān)基因plnEF、plnD及plNC8HK因賴氨酸的缺失表達(dá)顯著下調(diào)(P<0.05),而上述基因在外源賴氨酸質(zhì)量濃度達(dá)到2.0 g/L前,上調(diào)水平隨賴氨酸添加量的增大而增大。氨基酸合成關(guān)鍵基因dapG、yclM 因賴氨酸缺失表達(dá)顯著上調(diào),相反,上述基因在賴氨酸質(zhì)量濃度為2.0 g/L時(shí)表達(dá)量顯著下調(diào)(P<0.05)。由上述研究結(jié)果推測(cè),當(dāng)賴氨酸缺失時(shí),菌體通過上調(diào)基因dapG 和yclM 的表達(dá)以合成多種蛋白質(zhì)保證其正常生長代謝,賴氨酸可正向誘導(dǎo)該菌細(xì)菌素合成,其可能作為細(xì)菌素合成底物發(fā)揮作用。
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