目的:探究全局性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子CodY在單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)抗氧化應(yīng)激中的作用。方法:利用H2O2對(duì)處于對(duì)數(shù)中期(OD600 nm=0.65)的Lm野生株EGDe和CodY缺失株EGDeDcodY進(jìn)行氧化脅迫,比較兩菌株氧化耐受能力、抗氧化應(yīng)激物(過(guò)氧化氫酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽(glutathione,GSH))活性或含量差異;通過(guò)隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA技術(shù)比較兩菌株基因組模板穩(wěn)定性(genomic template stability,GTS);利用實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)檢測(cè)兩菌株抗氧化應(yīng)激物編碼基因以及DNA損傷誘導(dǎo)反應(yīng)(SOS反應(yīng))重要基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)變化。結(jié)果:1)H2O2對(duì)EGDe的最低抑菌濃度和最低殺菌濃度大約是EGDeDcodY的2 倍,當(dāng)H2O2濃度超過(guò)20 mmol/L時(shí),EGDeDcodY抑菌圈直徑極顯著大于EGDe(P≤0.01)。2)200 mmol/L H2O2完全抑制EGDeDcodY生長(zhǎng)而EGDe生長(zhǎng)速率則有所減慢。3)H2O2脅迫使EGDe和EGDeDcodY中CAT活力均下降,但轉(zhuǎn)錄水平并沒(méi)有顯著變化;SOD活力在兩菌株內(nèi)無(wú)明顯變化,但轉(zhuǎn)錄表達(dá)在EGDe和EGDeDcodY中差異高度顯著(P≤0.001);值得注意的是,GSH編碼基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)和其含量在EGDe和EGDeDcodY中變化趨勢(shì)基本一致,隨H2O2脅迫時(shí)間延長(zhǎng)呈先顯著下降后略微上升,而且與EGDe相比,GSH在EGDeDcodY中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平具有極顯著差異(P≤0.01)。4)EGDe和EGDeDcodY的GTS分別為93.1%和80.0%;real-time PCR顯示EGDeDcodY中參與SOS反應(yīng)的重要基因(recA、lexA、recR、lmo1302、lmo1975)轉(zhuǎn)錄表達(dá)受到高度顯著抑制(P≤0.001),而EGDe中recA、lmo1302和lmo1975的轉(zhuǎn)錄表達(dá)被激活。結(jié)論:CodY缺失導(dǎo)致細(xì)菌在H2O2脅迫下的耐受能力和生長(zhǎng)速率顯著降低,GSH含量下降,GTS降低,參與SOS反應(yīng)的重要基因表達(dá)受到顯著抑制,表明CodY在Lm抵御氧化脅迫中發(fā)揮了重要的調(diào)控作用。
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