領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
為了獲得苦蕎麥主要過敏蛋白全長基因并深入開展苦蕎過敏蛋白的研究,本實(shí)驗(yàn)在先前獲得的苦蕎麥主要過敏蛋白C端(TBa)基因序列的基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)不同的引物,以開花20d左右的苦蕎麥果實(shí)為材料提取總RNA,并以此RNA為模板,通過RT-PCR和5’-RACE等方法,擴(kuò)增,克隆獲得苦蕎麥主要過敏蛋白N端(命名為TBb)cDNA序列。序列分析結(jié)果表明,該序列由1005bp組成,開放閱讀框?yàn)?60bp,可編碼一個(gè)由320個(gè)氨基酸殘基組成的功能蛋白。同源性分析顯示,此核苷酸序列與甜蕎麥過敏性貯藏蛋白及豆球類蛋白的同源性達(dá)到90%。由此核苷酸序列推導(dǎo)出的氨基酸序列與甜蕎麥13S貯藏蛋白有84%的同源性,與甜蕎麥主要過敏蛋白有76%的同源性。苦蕎麥主要過敏蛋白N端基因的獲得為該蛋白的重組表達(dá)及其生物學(xué)活性等研究建立了前期基礎(chǔ)。
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