選取阪崎克羅諾桿菌中atpD、gyrB、infB、fusA和glnS管家基因作為靶序列,構(gòu)建質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)樣品快速檢測(cè)克羅諾桿菌。通過測(cè)序和菌落聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)對(duì)構(gòu)建的重組質(zhì)粒進(jìn)行驗(yàn)證,傳15 代后對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證質(zhì)粒穩(wěn)定性。制備的atpD、gyrB、infB、fusA和glnS質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)樣品,對(duì)其進(jìn)行定性實(shí)驗(yàn),并檢測(cè)其檢出限和穩(wěn)定性,然后使用atpD、gyrB、infB、fusA和glnS質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)嬰幼兒奶粉中克羅諾桿菌進(jìn)行檢測(cè)。通過菌落PCR和測(cè)序結(jié)果顯示atpD、gyrB、infB、fusA和glnS質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)樣品制備成功。PCR體系對(duì)質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)樣品檢測(cè)具有特異性,atpD、gyrB、infB、fusA和glnS檢出限分別為1.14×106、1.07×107、1.09×107、1.73×105、7.54×105 拷貝/μL。質(zhì)粒凍干粉可以在-20、4、25 ℃穩(wěn)定保存90 d。將質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)樣品用于23 份嬰幼兒奶粉樣品檢測(cè),檢測(cè)出1 份具有g(shù)yrB管家基因。參考GB 4789.40—2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 克羅諾桿菌屬(阪崎腸桿菌)檢驗(yàn)》的方法進(jìn)行傳統(tǒng)微生物分離檢測(cè),未檢測(cè)出克羅諾桿菌。相較于傳統(tǒng)方法質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)樣品的應(yīng)用極大提高了樣品的檢測(cè)效率。
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