為探究羅非魚源膠原蛋白肽含量的快速測定方法,以羅非魚皮膠原蛋白肽為對照品,改良雙縮脲比色法測定肽含量的操作方法,考察顯色絡(luò)合物最大吸收波長、線性擬合度高的肽和三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)用量范圍、pH值;在優(yōu)化條件下對標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行重復(fù)性、精密度評價(jià)以及加樣回收率實(shí)驗(yàn);研究本方法對不同分子質(zhì)量羅非魚皮及魚鱗膠原蛋白肽體系檢測的適用性。結(jié)果顯示,當(dāng)膠原蛋白肽(標(biāo)稱分子質(zhì)量3?kDa)質(zhì)量濃度在0.3~1.5?mg/mL范圍內(nèi),使用13%?TCA溶液,調(diào)整體系pH?12.5,在波長545?nm處檢測,吸光度與肽質(zhì)量濃度線性擬合好(R2=0.999),標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.144?9x+0.001?5;重復(fù)性和精密度實(shí)驗(yàn)得到相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)分別為1.86%和1.84%,加樣回收率分別為113.9%、109.7%,RSD分別為1.39%、1.00%;線性范圍寬、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高。將本法應(yīng)用于不同種類羅非魚肽產(chǎn)品體系的檢測,加樣回收率相差不大,偏差均較小,說明本法簡便、快捷,適用于羅非魚源肽含量的檢測。
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