研究氯化鈣(CaCl2)對(duì)食品腐敗株熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)生物被膜形成特征的影響。采用結(jié)晶紫法、菌體計(jì)數(shù)、苯酚-硫酸法、共聚焦掃描顯微鏡和實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測(cè)Ca2+對(duì)熒光假單胞菌的生物被膜形成、多糖分泌、被膜結(jié)構(gòu)及相關(guān)基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明,0.1 mmol/L Ca2+刺激熒光假單胞菌生物被膜,隨著濃度增加被膜形成增強(qiáng),其中1 mmol/L促進(jìn)最明顯,而高于10 mmol/L作用減弱,并且Ca2+不影響浮游細(xì)菌生長(zhǎng);同時(shí),0.1 mmol/L和1 mmol/L Ca2+對(duì)胞外多糖、薄膜和泳動(dòng)性均呈現(xiàn)促進(jìn)效果,而高濃度下呈現(xiàn)抑制;共聚焦掃描顯微鏡觀察熒光假單胞菌對(duì)照組、1 mmol/L和20 mmol/L Ca2+處理組的成熟生物被膜厚度分別為20.0、40.0 μm和25.0 μm,其中添加1 mmol/L Ca2+顯著增加PF07被膜厚度、菌體和胞外聚合物分泌量,使被膜結(jié)構(gòu)更致密;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)顯示,1 mmol/L Ca2+刺激菌體黏附素lapA、藻多糖alg、鞭毛flgA基因表達(dá)量增加3~4 倍,并且Ca2+均顯著刺激AHLs合成酶luxI基因的表達(dá),提示Ca2+影響生物被膜與群體感應(yīng)密切相關(guān)。可見(jiàn),食品介質(zhì)中CaCl2通過(guò)影響菌體黏附行為、胞外分泌物、基因表達(dá)導(dǎo)致熒光假單胞菌生物被膜形成特征和結(jié)構(gòu)的改變,該研究為復(fù)雜的食品介質(zhì)中腐敗菌生物被膜形成和黏附提供依據(jù)。
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