為在大腸桿菌中可溶表達具有生物活性的IIa類細菌素,以植物乳桿菌素LPL-1為研究對象,將植物乳桿菌素LPL-1的表達基因克隆至阿拉伯糖啟動子下,C-端與His-tag序列融合表達,以單核細胞性李斯特菌ATCC 54002為指示菌,鑒定重組細菌素的活性。通過CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)對大腸桿菌BW25331基因組進行編輯,突變過氧化物酶基因(ahpC),敲除硫氧還蛋白還原酶(trxB)和谷胱甘肽還原酶(gor)基因,成功構(gòu)建了適宜IIa類細菌素表達的細胞工廠E. coil(ΔtrxB+Δgor+ahpCM)。表達產(chǎn)物經(jīng)親和層析純化后,對其理化性質(zhì)進行分析,證明重組細菌素具有熱穩(wěn)定性(60~100 ℃)、酸堿穩(wěn)定性(pH 2~11)、表面活性劑穩(wěn)定性。本研究實現(xiàn)了植物乳桿菌素LPL-1在大腸桿菌中的活性表達,重組表達的細菌素具有穩(wěn)定的理化性質(zhì),在食品行業(yè)具有廣泛的應用潛力。
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