為闡明金屬抗菌肽SIF4對食源性大腸桿菌基于胞內(nèi)核酸和蛋白質(zhì)靶點(diǎn)的非膜損傷抑菌機(jī)理,本實(shí)驗(yàn)對SIF4處理下胞內(nèi)核酸生物合成情況進(jìn)行研究,并對SIF4與溴化乙錠(ethidium bromide,EB)競爭性結(jié)合基因組DNA熒光光譜、與基因組DNA互作紫外光譜以及SIF4與基因組DNA的結(jié)合方式進(jìn)行分析,同時(shí)對胞內(nèi)蛋白質(zhì)生物合成影響進(jìn)行系統(tǒng)研究。結(jié)果表明,SIF4可通過溝槽嵌入與大腸桿菌基因組DNA結(jié)合,對核酸生物合成抑制存在劑量效應(yīng)關(guān)系;EB競爭性結(jié)合DNA熒光光譜分析結(jié)果表明,SIF4可通過嵌插結(jié)合和靜電吸附競爭結(jié)合EB與基因組DNA的結(jié)合位點(diǎn);與基因組DNA互作紫外光譜分析結(jié)果表明,SIF4與基因組DNA結(jié)合可改變其分子構(gòu)象,但不斷裂基因組DNA雙鏈結(jié)構(gòu);圓二色光譜分析結(jié)果表明,與SIF4結(jié)合后,基因組DNA堿基堆積力被削弱,雙螺旋結(jié)構(gòu)變得松散,基因組DNA結(jié)構(gòu)由B構(gòu)型向C型轉(zhuǎn)變;胞內(nèi)蛋白質(zhì)生物合成影響分析結(jié)果表明,SIF4可顯著影響胞內(nèi)蛋白質(zhì)生物合成,其抑制效應(yīng)與SIF4處理時(shí)間和處理劑量存在正相關(guān)關(guān)系。綜上,SIF4可通過與基因組DNA進(jìn)行靜電吸附或嵌插結(jié)合進(jìn)入到DNA溝槽,影響DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄生物量以及蛋白質(zhì)翻譯,從而實(shí)現(xiàn)大腸桿菌非膜損傷抑制。本研究結(jié)果可為闡明基于核酸與蛋白質(zhì)靶點(diǎn)的非膜損傷抑菌機(jī)理和食源性大腸桿菌生物防控提供支持。
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