本實(shí)驗(yàn)采用H2O2誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞建立細(xì)胞氧化損傷模型,確定H2O2最佳處理濃度和時(shí)間,研究5 條牦牛乳酪蛋白抗氧化肽(AFK、IEQI、FPFF、LPVPQ、RELEEL)對(duì)H2O2誘導(dǎo)損傷HEK293細(xì)胞存活率、丙二醛含量、抗氧化酶類活力、還原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽含量的影響,并探討牦牛乳酪蛋白抗氧化肽的體外抗氧化作用機(jī)制,為其在高附加值生物制品及功能食品領(lǐng)域的開發(fā)與應(yīng)用提供理論依據(jù)。結(jié)果表明:牦牛乳酪蛋白抗氧化肽對(duì)不同的自由基具有不同的清除作用,但均呈劑量效應(yīng)關(guān)系;使用終濃度為400 μmol/L的H2O2處理HEK293細(xì)胞12 h后,對(duì)細(xì)胞的抑制率為(46.21±0.40)%;細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果表明,5 條抗氧化肽對(duì)HEK293細(xì)胞既無毒副作用,也無促進(jìn)增殖作用;牦牛乳酪蛋白抗氧化肽能夠顯著降低HEK-293氧化損傷細(xì)胞中的丙二醛(除LPVPQ)、氧化型谷胱甘肽含量,并增強(qiáng)抗氧化酶活性,其中200 μg/mL抗氧化肽RELEEL能夠顯著降低丙二醛含量至(0.062±0.000)nmol/104 cells,提升谷胱甘肽含量至(61.17±2.48)μg/106 cells,并維持較高的谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽值(64.93±0.95);200 μg/mL抗氧化肽LPVPQ能夠顯著降低氧化型谷胱甘肽含量至(0.74±0.26)μg/106 cells,增強(qiáng)超氧化物歧化酶活力至(1.17±0.02)U/104 cells;200 μg/mL抗氧化肽AFK能夠顯著增強(qiáng)過氧化氫酶活力至(0.60±0.09)U/104 cells。上述結(jié)果顯示,牦牛乳酪蛋白抗氧化肽對(duì)氧化損傷的細(xì)胞具有積極影響,可為下一步相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)提供參考。
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