以蛋白核小球藻為原料制備小球藻蛋白酶解物,采用超濾和葡聚糖凝膠對(duì)其進(jìn)行分離純化,以胰脂肪酶活性抑制率為指標(biāo)篩選具有降脂活性的肽組分,獲得蛋白核小球藻胰脂肪酶抑制肽(記為PES)。通過(guò)測(cè)定高糖飲食秀麗隱桿線蟲(chóng)體內(nèi)的脂肪沉積、甘油三酯和總膽固醇水平評(píng)價(jià)純化肽PES的降脂活性。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜鑒定PES肽序列,結(jié)合分子對(duì)接技術(shù)篩選出潛在的胰脂肪酶抑制肽段,進(jìn)一步驗(yàn)證合成多肽的胰脂肪酶抑制活性。結(jié)果表明,PES具有較好的降脂活性,質(zhì)量濃度為1 mg/mL時(shí)能夠抑制高糖飲食線蟲(chóng)體內(nèi)22.5%的脂肪沉積,降低27.4%甘油三酯和29.4%總膽固醇水平;經(jīng)鑒定得到999 條肽段,進(jìn)一步篩選得到4 條潛在的胰脂肪酶抑制肽段,其中胰脂肪酶活性抑制率最高的肽段是FLGPF,在8 mg/mL時(shí)抑制率達(dá)50.12%,抑制類型為可逆非競(jìng)爭(zhēng)性抑制,抑制常數(shù)為5.23 mg/mL;分子對(duì)接表明FLGPF可與人胰脂肪酶以π-氫鍵、π-陽(yáng)離子和氫鍵作用更好地結(jié)合。該研究可為蛋白核小球藻降脂肽的開(kāi)發(fā)利用提供理論參考。
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