領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
本實(shí)驗(yàn)以海洋來源的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶（cyclodextrin glycosyltransferase，CGTase）my20為研究對象，構(gòu)建了D、E以及DE結(jié)構(gòu)域截短突變體，通過pET-24a載體和宿主菌E. coli BL21（DE3）進(jìn)行異源表達(dá)，并利用鎳親和層析柱純化得到純酶。以my20環(huán)化比活力為100%計(jì)，my20ΔD、my20ΔE、my20ΔDE相對環(huán)化活力分別約為197%、22%、17%，表明E結(jié)構(gòu)域是CGTase催化環(huán)化反應(yīng)的重要結(jié)構(gòu)域，D結(jié)構(gòu)域的存在可能降低了底物分子進(jìn)入催化結(jié)構(gòu)域的能力。my20為耐熱酶，3 種截短突變酶相較之下耐熱性均有不同程度的降低，說明D、E結(jié)構(gòu)域在CGTase耐熱性方面具有重要的作用。my20在缺失了DE結(jié)構(gòu)域后，催化產(chǎn)物中α-環(huán)糊精占比相較其他截短酶提升約8%，表明缺失DE結(jié)構(gòu)域影響其產(chǎn)物的特異性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為CGTase通過結(jié)構(gòu)域改造在工業(yè)生產(chǎn)方面發(fā)揮作用提供一定的理論基礎(chǔ)。
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