本研究基于酶解結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)技術(shù),開發(fā)了一種測定蔬菜和水果中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法。利用灰色鏈霉菌蛋白酶酶解樣品,并加入抗氧化劑丁基羥基苯甲醚,再取上清液進(jìn)行UPLC-MS/MS分析;以甲醇-0.02%甲酸溶液作為流動相進(jìn)行梯度洗脫,經(jīng)Phenomenex kinetex F5色譜柱分離,用電噴霧電離源正離子掃描和多反應(yīng)檢測模式進(jìn)行檢測,并通過內(nèi)標(biāo)法定量。天冬酰胺和谷氨酰胺在10~1 000 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2>0.999)。方法檢出限為1.5 mg/100 g,定量限為5.0 mg/100 g,回收率在80.0%~112.8%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%~9.1%。對市場常見的49 種蔬菜和50 種水果進(jìn)行檢測,結(jié)果表明在蔬菜中天冬酰胺、谷氨酰胺的總含量均值從高到低排序?yàn)槎诡悺⑹碛箢悺⑹[蒜類、菌類、瓜類、茄果類、白菜類、綠葉菜類,其中豆類的天冬酰胺、谷氨酰胺總含量均極顯著高于綠葉菜類(P<0.01);在水果中天冬酰胺、谷氨酰胺的總含量均值從高到低依次為核果類、西甜瓜類、聚復(fù)果類、漿果類、柑果類、香蕉類、殼果類,核果類的天冬酰胺、谷氨酰胺總含量均顯著高于殼果類(P<0.05)。本研究結(jié)果提示尿素循環(huán)障礙患者在日常膳食中可以更多地攝入綠葉菜類、殼果類等天冬酰胺、谷氨酰胺含量少的果蔬,特別是支鏈氨基酸與(天冬酰胺+谷氨酰胺)含量比值較高的小白菜、木耳、大蔥、椰汁、桂圓、柚子等果蔬。另外,應(yīng)減少對土豆、南瓜、長豆角、香瓜、紅李、黃桃等比值較低果蔬的攝入。
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