探究羅漢果干果多糖(Siraitia grosuenorii polysaccharide,SGP)的結(jié)構(gòu)及其免疫調(diào)節(jié)活性。利用水提醇沉的方法從羅漢果干果中提取粗多糖,進(jìn)一步經(jīng)Cellulose DE-52和Sephadex G-200柱分離純化獲得均一多糖組分SGP-C2和SGP-D1。采用PMP柱前衍生及配備有示差折光檢測(cè)器的高效液相色譜系統(tǒng)測(cè)定其單糖組成和分子質(zhì)量,并通過紅外光譜與核磁共振對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)一步表征。采用中性紅比色法檢測(cè)SGP-C2和SGP-D1對(duì)RAW264.7細(xì)胞的吞噬活性,熒光探針DCFH-DA試劑檢測(cè)其活性氧(reactive oxygen species,ROS)的釋放,Griess法檢測(cè)其NO生成以及利用酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒檢測(cè)其對(duì)腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor,TNF)-α與白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)分泌水平的影響。SGP-C2和SGP-D1是由葡萄糖醛酸、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖(galactose,Gal)、阿拉伯糖組成的雜多糖,其單糖物質(zhì)的量之比分別為0.78∶1.84∶26.57∶1.31∶0.49∶0.06和1.37∶2.00∶20.79∶0.61∶0.12∶0.25,分子質(zhì)量分別為5.0×105 Da和7.6×105 Da。核磁共振譜圖顯示SGP-C2主鏈結(jié)構(gòu)為→4)-α-D-GalpA-(1→和→4)-α-D-GalpAMe-(1→,而SGP-D1主鏈結(jié)構(gòu)為→4)-α-D-GalpA-(1→。同時(shí),6.25~25 μg/mL質(zhì)量濃度范圍的SGP-C2和SGP-D1具有促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬、NO生成、TNF-α和IL-6分泌的作用,SGP-D1還具有促進(jìn)ROS釋放的活性。結(jié)果表明,羅漢果多糖SGP-C2和SGP-D1具有體外免疫調(diào)控活性,為羅漢果多糖資源的開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)和技術(shù)路線。
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