以仿刺參腸為原料,提取得到粗多糖,經(jīng)Q-Sepharose Fast Flow陰離子交換色譜柱分離得到3 種多糖(SCG1~SCG3)。采用PMP柱前衍生高效液相色譜法、高效凝膠滲透色譜法對(duì)3 種多糖的單糖組成、分子質(zhì)量進(jìn)行分析;采用活化部分凝血活酶時(shí)間(activated partial thromboplastin time,APTT)、凝血酶時(shí)間(thrombin time,TT)、凝血酶原時(shí)間(prothrombin time,PT)、纖維蛋白原(fibrinogen,F(xiàn)IB)含量評(píng)價(jià)多糖的抗凝血活性,篩選高抗凝血活性多糖;通過理化性質(zhì)分析、紅外光譜分析、核磁共振波譜分析對(duì)高抗凝血活性多糖進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。結(jié)果顯示,仿刺參粗多糖的提取得率為2.75%,按照多糖SCG1~SCG3的順序,巖藻糖的比例逐漸升高,SCG3僅含有巖藻糖;分子質(zhì)量逐漸升高,其中SCG3分子質(zhì)量為171.5 kDa。3 種多糖對(duì)APTT延長作用逐漸增強(qiáng),SCG3的延長作用高于陽性對(duì)照低肝素,20 μg/mL時(shí)可達(dá)500 s以上;SCG3對(duì)PT延長作用最強(qiáng),200 μg/mL時(shí)可達(dá)500 s以上,SCG1、SCG2作用不明顯;SCG2、SCG3對(duì)TT均有顯著延長作用,且SCG3作用最明顯,50 μg/mL時(shí)可達(dá)500 s以上,SCG1幾乎沒有延長作用;SCG3質(zhì)量濃度超過50 μg/mL時(shí)可顯著降低FIB的含量。因此,SCG3是一種多機(jī)制高抗凝血活性多糖。結(jié)構(gòu)分析結(jié)果顯示,SCG3的總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50.36%,蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.67%,硫酸基質(zhì)量分?jǐn)?shù)為28.31%,表明SCG3是一種硫酸化巖藻多糖,即巖藻聚糖硫酸酯。紅外光譜、核磁共振波譜進(jìn)一步驗(yàn)證SCG3是一種高純度巖藻聚糖硫酸酯,主要由糖基→3)-α-L-Fucp-(1→、→3)-α-L-Fucp(2SO4)-(1→及→3)-α-L-Fucp(2,4SO4)-(1→組成。
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