為研究傳統(tǒng)真菌發(fā)酵核桃蛋白產(chǎn)物中具有維持血糖健康水平的肽段,在發(fā)酵產(chǎn)物動(dòng)物喂養(yǎng)總體評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)上,采用Sephadex G-50凝膠色譜和高效液相色譜分級(jí)分離純化,以α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶和二肽基態(tài)酶-IV活性為評(píng)價(jià)指標(biāo),采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行分析,借助生物信息學(xué)工具對(duì)得到的分離組分IV、V、VI組共有的和差異的肽段,及其來(lái)源的蛋白,獲得主要活性肽段,利用液相色譜測(cè)定含量,通過(guò)檢索UniProt在線平臺(tái)獲得相關(guān)肽的來(lái)源,并用分子對(duì)接工具分析活性肽與3 種酶的相互作用。結(jié)果表明,通過(guò)2型糖尿病小鼠造模,可以得到粗肽可以有效控制患病小鼠的體質(zhì)重、攝食量和血糖,緩解胰島素抵抗和提高葡萄糖耐量。在Sephadex G-50凝膠分離純化后得到的分子質(zhì)量較小的組分IV、V、VI中,組分V對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制活性與組分IV和VI沒(méi)有顯著差異,但是對(duì)二肽基態(tài)酶-IV抑制活性顯著其他兩組。隨后對(duì)組分IV、V、VI進(jìn)行多肽分析比較,并且對(duì)其相同肽段進(jìn)行含量測(cè)定,發(fā)現(xiàn)在第V中,與VI相同的肽段MMRPDEDEQEGQRQ和LPLLR占總肽含量的82.3%,對(duì)DPP-IV抑制活性94.3%源于這兩條肽的作用。因此,在眾多相同肽段中這兩條肽鏈極具血糖調(diào)節(jié)活性肽開(kāi)發(fā)前景。
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