對從高鹽稀態(tài)醬醪中篩選得到的米曲霉(Aspergillus oryzae)K9進行常壓室溫等離子體(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)復合紫外誘變,并利用高鹽含量平板進行馴化培養(yǎng)和篩選,旨在得到產耐鹽高活性蛋白酶的菌株。首先對K9進行ARTP誘變,篩選得到優(yōu)勢菌株S-G27,其中性蛋白酶活性較K9提高35.82%;接著以S-G27為出發(fā)菌株進行紫外誘變,篩選得到優(yōu)勢菌株G-U2,其中性蛋白酶活性較K9提高56.81%;G-U2所產蛋白酶的耐鹽性進一步提高,在15% NaCl溶液中,G-U2中性蛋白酶活性殘留率為K9的1.94 倍;G-U2穩(wěn)定性良好,第7代時菌株的中性蛋白酶活性殘留率為92%;和出發(fā)菌株K9相比,G-U2的菌絲更短、孢子更多、孢子體積更大且表面紋飾更多;誘變未引起黃曲霉毒素相關基因的表達,符合生產安全要求。在模擬發(fā)酵醬油實驗中,發(fā)酵終點G-U2中性蛋白酶活性、酸性蛋白酶活性、氨基酸態(tài)氮質量濃度分別較K9高出120.19%、52.29%、18.37%。
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