從雨生紅球藻和紅法夫酵母中分離制備左旋和右旋蝦青素(astaxanthin,AST),聚焦其對(duì)豬胰腺α-淀粉酶(porcine pancreatic α-amylase,PPAA)活性的抑制效果,通過(guò)圓二色光譜、同步熒光光譜、內(nèi)源熒光光譜和分子對(duì)接等技術(shù)揭示AST-PPAA相互作用及潛在機(jī)制。結(jié)果表明,成功制備并鑒定高純度的左旋(>94%)和右旋(>96%)AST,兩者對(duì)PPAA活性抑制效果沒(méi)有顯著差異,且均對(duì)PPAA的色氨酸殘基微環(huán)境產(chǎn)生輕微影響,但不改變蛋白整體構(gòu)象。分子對(duì)接分析表明,AST異構(gòu)體與PPAA的結(jié)合位點(diǎn)位于其催化口袋,與酶抑制劑阿卡波糖的結(jié)合位點(diǎn)相同,并與酶催化中心的Asp197、Glu233和Asp300關(guān)鍵氨基酸殘基相互作用,其中Glu233與AST立體異構(gòu)體均形成氫鍵,表明左旋和右旋AST均是通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制機(jī)制抑制PPAA活性。內(nèi)源性熒光光譜顯示,AST立體異構(gòu)體與PPAA相互作用時(shí)均表現(xiàn)出靜態(tài)猝滅現(xiàn)象,表明AST與PPAA在基態(tài)形成了非熒光復(fù)合物。盡管右旋AST表現(xiàn)出較低的熱力學(xué)參數(shù)、較短的氫鍵鍵長(zhǎng)以及與較多氨基酸殘基相互作用,但其與左旋AST的結(jié)合親和力相當(dāng),由此表明其抑制活性不受立體構(gòu)型差異影響。研究結(jié)果為AST作為預(yù)防高血糖的天然產(chǎn)物提供了理論依據(jù),并為開發(fā)新型PPAA抑制劑和功能性食品提供了科學(xué)支持。
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