目的:以血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制活性和ACE2上調(diào)活性作為評價指標,用鮑魚肌肉制備降壓活性肽,并探討其作用機制。方法:采用酶解法優(yōu)化鮑魚肌肉酶解條件,篩選出體外較高ACE抑制活性和ACE2上調(diào)活性的組分,并利用超濾、凝膠柱層析及反相高效液相色譜分離純化活性肽,結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜鑒定其序列。通過分子對接、抑制動力學及分子動力學模擬分析其抑制類型與結(jié)合穩(wěn)定性。結(jié)果:鮑魚肌肉經(jīng)酶解和分離純化后,通過De novo測序獲得26 條降壓肽。基于分子對接結(jié)合自由能篩選,選定Ala-Gly-Phe(AGF)、Ala-Thr-Lys(ATK)、Pro-Ile-Ile-Thr-Lys(PIITK)、Ala-Lys(AK)、Pro-Val-Gly-Arg(PVGR)和Pro-Trp(PW)6 個肽段,其中PIITK與PVGR顯示出較強的ACE抑制活性;在ACE2上調(diào)方面,PW效果最為顯著,其次為PVGR、AK和ATK。對ACE抑制作用方面,PIITK表現(xiàn)為混合性抑制,而PVGR表現(xiàn)為競爭性抑制。動力學模擬結(jié)果表明,PIITK-ACE及PVGR-ACE復合物體系均具有較高的結(jié)合穩(wěn)定性。結(jié)論:利用鮑魚肌肉制備生物活性肽為鮑魚功能性食品的研發(fā)和高值化利用提供了理論依據(jù)。
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