應(yīng)用牛津杯法從大菱鲆腸道分離的乳酸菌中篩選出對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì)菌均具有抑制作用的菌株LP1-4,經(jīng)生理生化反應(yīng)和16S rRNA鑒定為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)。通過(guò)溫度、pH值和蛋白酶等因素分析,結(jié)果表明菌株LP1-4無(wú)細(xì)胞上清液(cell-free supernatant,CFS)中抑菌物質(zhì)具有良好的熱穩(wěn)定性,在pH 2.5~5.0具有抑菌活性,且對(duì)蛋白酶敏感,初步判斷為細(xì)菌素類抑菌物質(zhì)。菌株LP1-4在最佳培養(yǎng)時(shí)間24 h時(shí)抑菌活性達(dá)到峰值,應(yīng)用乙酸乙酯萃取后抑菌圈直徑達(dá)25.42 mm。采用Labscale TFF System超濾分離和Sephadex G-25凝膠層析獲得小于1.0 ku分子質(zhì)量的細(xì)菌素。經(jīng)高效液相色譜純化分析,抑菌物質(zhì)在液相分離條件下目標(biāo)峰的保留時(shí)間為5.0 min。采用基質(zhì)輔助激光解吸電離串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜確定細(xì)菌素分子質(zhì)量為0.854 ku,其氨基酸排列順序?yàn)楣劝彼?天冬酰胺-賴氨酸-脯氨酸-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-賴氨酸(ENKPAAPK)。本研究從大菱鲆腸道篩選具有廣譜抗菌活性的菌株LP1-4,對(duì)研發(fā)控制水產(chǎn)品腐敗菌和致病菌的乳酸菌生物防腐保鮮制劑具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
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