建立一種同時(shí)檢測(cè)食品中金黃色葡萄球菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7以及霉菌的多重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測(cè)方法。根據(jù)金黃色葡萄球菌的耐熱核酸酶基因(nuc)、沙門氏菌的侵襲正調(diào)節(jié)蛋白基因(hilA)、大腸桿菌O157:H7鞭毛基因(flic)、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的毒力調(diào)控蛋白基因(prfA)及霉菌18S?rRNA基因V5區(qū)分別設(shè)計(jì)5?對(duì)特異性引物,并對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系和擴(kuò)增條件進(jìn)行優(yōu)化,確定獲得特異性良好的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。而后在37?℃對(duì)人工污染致病菌的香腸、面包和豆腐進(jìn)行增菌培養(yǎng),5?種致病微生物在20?h內(nèi)的檢出限均可達(dá)到100?CFU/25?g。本實(shí)驗(yàn)建立的多重PCR檢測(cè)方法適用于食品中4?種細(xì)菌與常見霉菌的同時(shí)檢測(cè),相較于傳統(tǒng)檢測(cè)方法,具有快速、簡(jiǎn)便、特異性高的優(yōu)點(diǎn)。
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