領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
金黃色葡萄球菌K型腸毒素（Staphylococcus aureus enterotoxin K，SEK）由金黃色葡萄球菌腸毒素基因簇編碼，流行病學(xué)顯示，編碼SEK蛋白的sek基因在食品源金黃色葡萄球菌菌株中具有較高的檢出率，說明SEK也可能是一種重要的食品中毒潛在致病因子。本研究將截去N端信號肽的SEK蛋白編碼基因與原核表達(dá)載體pET-28a（＋）連接，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a（＋）-ΔNspsek；通過對sek基因在不同原核表達(dá)宿主菌中的表達(dá)及表達(dá)條件優(yōu)化分析，確立SEK蛋白的最優(yōu)表達(dá)條件；利用鎳親合層析純化含組氨酸（His）標(biāo)簽的SEK融合蛋白，將凝血酶切除His標(biāo)簽后的SEK蛋白進(jìn)行聚合狀態(tài)及熱穩(wěn)定分析、熒光發(fā)射譜和圓二色譜分析。結(jié)果表明，重組蛋白SEK表達(dá)成功，熱處理導(dǎo)致蛋白部分降解；熒光光譜揭示SEK蛋白在278?nm和295?nm波長處具有相同的最大色氨酸發(fā)射峰；344?nm波長處表明SEK蛋白處于緊密折疊的天然狀態(tài)；圓二色譜分析表明，ΔNspSEK重組蛋白富含β-折疊（23.6%）、β-轉(zhuǎn)角（28%）以及α-螺旋（29.1%）等二級結(jié)構(gòu)。為深入研究SEK蛋白的結(jié)構(gòu)與功能提供基礎(chǔ)，也對改進(jìn)食品加工工藝和提高食品安全具有指導(dǎo)意義。
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