探究微芯片脈沖電場(microchip pulse electric field,MPEF)技術(shù)對畢赤酵母的致死效果和致死機理。在400?V電壓和80?個脈沖條件下,MPEF技術(shù)可以很好地鈍化畢赤酵母。借助新一代高通量測序技術(shù)對MPEF處理前后畢赤酵母基因的表達水平進行分析,將差異表達基因在基因本體(gene ontology,GO)和京都基因與基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)數(shù)據(jù)庫中進行比對。測序結(jié)果表明,MPEF組和對照組差異變化顯著的基因共794?個,其中上調(diào)基因361?個,下調(diào)基因433?個;在MPEF作用下,半胱天冬蛋白酶活性、丙酮酸轉(zhuǎn)運等顯著上調(diào),而核苷酸代謝、核糖體生物合成、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄翻譯、RNA聚合酶活性、超氧化物歧化酶活性、跨膜運輸調(diào)節(jié)、維生素代謝等顯著下調(diào)。采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)對6?個差異基因進行驗證,得到與轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果一致的基因表達量變化趨勢。畢赤酵母體內(nèi)細胞結(jié)構(gòu)的破壞、基因損傷、蛋白質(zhì)合成和功能受限以及酶活性的改變可能是MPEF處理導致其死亡的主要原因。
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