領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
與植物體內(nèi)合成路徑不同，微生物體內(nèi)合成咖啡堿存在一條以黃嘌呤為底物，利用鳥嘌呤脫氨酶催化鳥嘌呤生成黃嘌呤有效合成咖啡堿的新途徑。為克隆鳥嘌呤脫氨酶的基因，構(gòu)建可高效合成黃嘌呤的原核表達(dá)載體并對(duì)外源蛋白活性進(jìn)行檢測(cè)，分別以釀酒酵母和大腸桿菌為研究材料，根據(jù)GenBank中釀酒酵母和大腸桿菌中鳥嘌呤脫氨酶基因gud1和egud序列設(shè)計(jì)引物，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)特異擴(kuò)增其基因片段，將目的基因連接至pMAL-c5X載體，轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21（DE3）中誘導(dǎo)蛋白表達(dá)，并用高效液相色譜法鑒定其目的蛋白的催化活性。結(jié)果表明重組載體pMAL-gud1、pMAL-egud均可用來(lái)合成黃嘌呤，且GUD1比EGUD合成黃嘌呤的效率更高。研究結(jié)果將進(jìn)一步豐富黑茶加工技術(shù)理論，同時(shí)為體外構(gòu)建高效咖啡堿生物工程菌提供理論支持。
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