領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
為獲得噬菌體qdsa001的內(nèi)溶素，本實(shí)驗(yàn)首先利用多種在線軟件對(duì)內(nèi)溶素lys56（GenBank：ARQ95812.1）的理化性質(zhì)、信號(hào)肽、跨膜域和結(jié)構(gòu)域等特性進(jìn)行分析，然后選擇克隆表達(dá)法制備目的蛋白。將合成的目的基因插入原核表達(dá)載體pET-30a中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-30a-lys56，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Rosetta（DE3）中，獲得表達(dá)穩(wěn)定的基因工程菌，經(jīng)異丙基硫代-β-D-半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside，IPTG）誘導(dǎo)表達(dá)，利用鎳瓊脂糖親和層析純化表達(dá)產(chǎn)物。經(jīng)在線軟件預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，該蛋白分子質(zhì)量為35.1 kDa，無(wú)信號(hào)肽和跨膜域，僅含有一個(gè)Ami_2結(jié)構(gòu)域。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析顯示重組蛋白表達(dá)成功，且以可溶性蛋白的形式存在于細(xì)胞破碎上清液，分子質(zhì)量約35?kDa，與預(yù)期蛋白大小一致。重組蛋白最佳表達(dá)條件為：IPTG濃度0.5?mmol/L，20?℃過(guò)夜誘導(dǎo)。
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