利用全基因合成方法合成了強烈熾熱球菌(Pyrococcus furiosus)的幾丁質(zhì)酶編碼基因并在大腸桿菌(Escherichia coli)中實現(xiàn)了可溶表達(dá)。利用該酶對低脫乙酰度殼聚糖進行水解并對獲得的殼寡糖產(chǎn)物進行組成及結(jié)構(gòu)分析。分子排阻高效液相色譜結(jié)果顯示,水解產(chǎn)物相對分子質(zhì)量分布范圍為1?000~5?000。基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜分析結(jié)果顯示,酶解產(chǎn)物中包含聚合度2~9、不同脫乙酰度的殼寡糖。核磁共振對酶解產(chǎn)物殼寡糖的結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果顯示,所有寡糖組分的還原端均主要由兩個連續(xù)的N-乙酰氨基葡萄糖組成。綜上,本研究利用來源于強烈熾熱球菌的幾丁質(zhì)酶制備了還原末端結(jié)構(gòu)確定的低脫乙酰度殼寡糖,為復(fù)雜結(jié)構(gòu)殼寡糖結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系研究提供了理論支持。
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