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—— 中國食品雜志社
單核細胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在動脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用。花色苷是一種具有多種生物學(xué)活性的多酚類黃酮化合物，富含于各種深色的蔬菜、水果及谷類中，其中矢車菊素-3-O-β-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-β-glucoside，Cy-3-g）是花色苷中重要的單體，本研究旨在探討黑米來源的Cy-3-g對脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的人單核白血病細胞（Tohoku hospital pediatrics-1，THP-1）炎癥損傷的作用及可能的分子機制。采用乙醇-鹽酸溶液浸提、大孔樹脂吸附洗脫等步驟得到黑米花色苷粗提物，然后用中壓液相層析聯(lián)合紫外檢測提取得到純化的Cy-3-g（純度＞96.5%）。用不同質(zhì)量濃度（0、0.10、0.25 μg/mL和0.50 μg/mL）Cy-3-g與THP-1細胞共孵育4 h，然后加入LPS（質(zhì)量濃度50 ng/mL）與細胞繼續(xù)孵育48 h，用酶聯(lián)免疫吸附試驗法測定培養(yǎng)液中白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6、IL-8、IL-10和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平，用定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）檢測細胞中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、Toll-樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4）和核因子κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）p65的mRNA表達水平，用Western blot蛋白免疫印跡法檢測TLR4、NF-κB p65、核因子κB抑制因子（inhibitor of NF-κB，IκBα）蛋白表達水平。結(jié)果表明，與溶劑對照組相比，LPS誘導(dǎo)的THP-1細胞IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA相對表達量和釋放水平可被不同質(zhì)量濃度Cy-3-g顯著抑制（P＜0.05、P＜0.01、P＜0.001），在LPS作用下，質(zhì)量濃度0.25、0.50 μg/mL Cy-3-g能夠顯著促進IL-10 mRNA表達（P＜0.01、P＜0.001），質(zhì)量濃度0.10、0.25、0.50 μg/mL Cy-3-g能夠顯著促進IL-10釋放（P＜0.05、P＜0.01、P＜0.001），但是不同質(zhì)量濃度Cy-3-g對LPS誘導(dǎo)的細胞IL-8 mRNA表達水平和釋放水平的促進作用無顯著差異（P＞0.05）。質(zhì)量濃度0.25、0.50 μg/mL Cy-3-g能夠顯著抑制TLR4和NF-κB p65的mRNA和蛋白表達（P＜0.05、P＜0.001、P＜0.01），同時能夠抑制IκBα和NF-κB p65的磷酸化，并抑制LPS對IκBα的降解作用。與溶劑對照組相比，NF-κB的特異性抑制劑Bay11-7082可高度顯著下調(diào)LPS誘導(dǎo)的THP-1細胞IL-1β、IL-6和TNF-α釋放水平（P＜0.001），但是與質(zhì)量濃度0.50 μg/mL Cy-3-g聯(lián)合使用時無協(xié)同抑制效果（P＞0.05）。綜上，黑米花色苷Cy-3-g能夠?qū)PS誘導(dǎo)的THP-1單核細胞炎癥損傷起到保護作用，其機制可能是下調(diào)TLR4/NF-κB介導(dǎo)的信號通路。
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