領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
為獲得苦蕎麥中蘆丁水解酶基因（Fagopyrum tartaricum rutin-hydrolyzing enzyme gene，F(xiàn)tRHE），以云蕎1號苦蕎種子為材料，制備獲得天然蘆丁水解酶（rutin-hydrolyzing enzyme，RHE），通過基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜鑒定天然RHE序列信息，結(jié)合轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，篩選苦蕎RHE基因FtRHE。結(jié)果顯示，純化的天然RHE，分子質(zhì)量約為62?kDa，肽質(zhì)量指紋圖譜證明其為一種β-葡萄糖苷酶，質(zhì)荷比為914.428?6的肽段FSISWSR為其特征肽段。在苦蕎種子轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中篩選獲得FtRHE基因序列基礎(chǔ)上，通過反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)獲得了苦蕎FtRHE基因。FtRHE開放閱讀框由1?539?個堿基組成，編碼512 個氨基酸，1～29位氨基酸為其信號肽。多重序列比對發(fā)現(xiàn)RHE與不同物種來源的β-葡萄糖苷酶氨基酸保守性不高，同源性普遍集中在54%～62%之間。構(gòu)建Bacmid-FtRHE桿粒，轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞Sf9后，成功表達(dá)了具有較高活性的重組RHE。結(jié)果表明，獲得的FtRHE即為苦蕎中RHE基因。該研究為高含量蘆丁及無苦澀味蕎麥育種以及由蘆丁生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)槲皮素等的應(yīng)用提供了理論支持。
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