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微滴數(shù)字PCR技術(shù)在多拷貝木聚糖酶釀酒酵母工程菌篩選中的應(yīng)用
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 156 發(fā)表時(shí)間: 2019-09-26
作者: 蘭雪,張斯童,李哲,常浩,孫旸,王剛,陳歡,王春鳳,陳光
關(guān)鍵詞: 微滴數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)|多拷貝|釀酒酵母|木聚糖酶|rDNA整合法
摘要:

為獲得高產(chǎn)木聚糖酶釀酒酵母工程菌,利用rDNA整合法構(gòu)建木聚糖酶釀酒酵母整合表達(dá)載體,實(shí)現(xiàn)木聚糖酶基因的多拷貝表達(dá),并利用微滴數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)化子拷貝數(shù)進(jìn)行檢測(cè),分析木聚糖酶基因拷貝數(shù)與酶活力之間的關(guān)系。結(jié)果表明:利用rDNA整合法獲得了10?株不同拷貝數(shù)木聚糖酶釀酒酵母工程菌,對(duì)其酶活力進(jìn)行測(cè)定,發(fā)現(xiàn)當(dāng)拷貝數(shù)小于9時(shí),菌株產(chǎn)酶能力隨拷貝數(shù)增加而增強(qiáng),9?拷貝數(shù)時(shí)菌株產(chǎn)酶能力最強(qiáng),酶活力為308?U/mL,超過9?拷貝,產(chǎn)酶能力降低。

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