領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
HD-Zip轉(zhuǎn)錄因子在植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中具有重要作用，蛋白水平的研究有助于進(jìn)一步闡釋其功能。將蘋(píng)果轉(zhuǎn)錄因子基因MdHB1分別連接到pGEX-6p-1和pET-28a（＋）表達(dá)載體，熱激轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞BL21（DE3），隨后用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG）誘導(dǎo)培養(yǎng)，分別得到了帶有GST和6×His標(biāo)簽的MdHB1融合蛋白（分別命名為MdHB1-GST和MdHB1-His6）。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析表明，在?18、28?℃和37?℃?3?個(gè)溫度誘導(dǎo)條件下都是沉淀中MdHB1-GST融合蛋白的量較多，37?℃尤為明顯，較低的誘導(dǎo)溫度（18?℃和28?℃）能夠提高融合蛋白MdHB1-GST可溶性形式存在的比例；28?℃條件下50?mg/L IPTG誘導(dǎo)的總蛋白量在8?h左右達(dá)到最大，且受IPTG質(zhì)量濃度（10、50、100?mg/L）的影響不大。以Ni-NTA柱純化的融合蛋白MdHB1-His6為抗原，成年兔免疫以制備多克隆抗體。間接酶聯(lián)免疫法檢測(cè)結(jié)果表明，所得抗體效價(jià)較高。蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，所制備多克隆抗體特異性良好，能夠從菌體和蘋(píng)果幼葉總蛋白中成功檢測(cè)MdHB1蛋白。綜上所述，本實(shí)驗(yàn)所得多克隆抗體能夠用于深入研究MdHB1在植物體內(nèi)的功能。
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