為獲得遺傳穩(wěn)定的單倍體酵母菌株,本實(shí)驗(yàn)以二倍體釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae W5為出發(fā)菌株,優(yōu)化單倍體制備和分離的條件,獲得單倍體細(xì)胞;利用隨機(jī)孢子分析法和MAT-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法對(duì)單倍體菌株進(jìn)行分離和鑒定,通過連續(xù)傳代培養(yǎng)的方式驗(yàn)證單倍體菌株的穩(wěn)定性,并從代謝水平分析單倍體菌株的發(fā)酵性能。研究表明:S.?cerevisiae?W5在改良SPM培養(yǎng)基中30?℃條件下培養(yǎng)8?d,產(chǎn)孢率最高為(35.57±0.82)%。經(jīng)30?mg/mL蝸牛酶液處理2?h后,菌懸液的孢子釋放率達(dá)到(47.06±0.23)%。本實(shí)驗(yàn)共分離出7?株單倍體菌株,其中菌株S.?cerevisiae?H14(MAT-a)遺傳性能最穩(wěn)定。當(dāng)以葡萄糖為底物,30 ℃、150?r/min發(fā)酵30?h,乙醇質(zhì)量濃度達(dá)到最大,為(40.46±1.06)g/L,較S.?cerevisiae?W5發(fā)酵24?h乙醇最大質(zhì)量濃度(51.65±2.39)g/L下降了21.67%,乙酸、乙偶姻的產(chǎn)量分別提高了12.7%和57.14%,獲得理想的單倍體菌株。本實(shí)驗(yàn)為S. cerevisiae單倍體的制備提供了一定研究經(jīng)驗(yàn),也豐富了酵母遺傳學(xué)研究的理論基礎(chǔ)。
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