采用雙酶酶解法制備魚鱗抗菌肽,進(jìn)行酶篩選并通過響應(yīng)面法優(yōu)化酶解條件;通過葡聚糖凝膠G-25分離純化酶解液,研究有效抑菌組分對不同菌的最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)。結(jié)果表明,當(dāng)采用堿性蛋白酶結(jié)合酸性蛋白酶分步酶解魚鱗,底物質(zhì)量濃度為30?g/100?mL時(shí),最適酶解條件為堿性蛋白酶在pH?9.5時(shí)首次酶解,酶解時(shí)間62?min,酶解溫度55?℃;酸性蛋白酶在pH?3.0時(shí)再次酶解,酶解時(shí)間3?h,酶解溫度34.4?℃。此條件下制備的酶解液對副溶血性弧菌的抑菌圈直徑為27.72?mm,與預(yù)測值基本相符。酶解液經(jīng)層析后,其抑菌性G2組分對假單胞菌和希瓦氏菌的MIC為1.56?μg/mL,對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、沙門菌及副溶血性弧菌的MIC為6.25?μg/mL。可見,雙酶酶解法制備的魚鱗抗菌肽具有較強(qiáng)的抑菌性。
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