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甲型副傷寒沙門菌特異性基因篩選及PCR檢測體系建立
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 127 發(fā)表時間: 2018-01-08
作者: 翟立公,王俊穎,張小雨,孟欣,崔葆,趙婉晴,牛萍
關(guān)鍵詞: 甲型副傷寒沙門菌;比較基因組;血清型特異性基因;聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
摘要:

以甲型副傷寒沙門菌為檢測目標(biāo),通過比較基因組和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)驗(yàn)證方法篩選到4 個該血清型的特異性基因,其中以gene_3105作為該血清型的檢測靶點(diǎn)設(shè)計引物PA23;并結(jié)合沙門菌屬特異性引物139-141,建立一種甲型副傷寒沙門菌的PCR檢測方法。優(yōu)化PCR反應(yīng)體系,并對該檢測體系的特異性、靈敏度、抗干擾能力及人工污染樣品檢出限等方面進(jìn)行評價。結(jié)果表明,當(dāng)樣品中含有甲型副傷寒沙門菌時,該體系能擴(kuò)增出2?條特異性條帶,含有其他血清型的沙門菌僅能擴(kuò)增出284?bp條帶,不含沙門菌無擴(kuò)增條帶產(chǎn)生。靈敏度評價表明,基因組DNA和純菌菌落檢出限分別為32.4?pg/μL和4.3×103?CFU/mL;抗干擾能力實(shí)驗(yàn)顯示,當(dāng)雞肉背景菌群和豬肉背景菌群濃度在106?CFU/mL和4.87×107?CFU/mL時,檢出限為6.43×104?CFU/mL。當(dāng)無菌的雞肉和豬肉樣品中添加N?CFU/25?g甲型副傷寒沙門菌時,經(jīng)10?h增菌,檢測結(jié)果為陽性(0<N<10)。實(shí)驗(yàn)建立甲型副傷寒沙門菌PCR檢測方法具有較好的特異性和靈敏度,有很好的應(yīng)用價值,可在食品安全領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

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