目的:采用表面等離子體共振技術(shù)(surface plasmon resonance,SPR)測(cè)定酪氨酸酶與特異性卵黃抗體(IgY)及其與底物L(fēng)-多巴的親和力,探討特異性IgY對(duì)酪氨酸酶與底物親和力的影響。方法:將裸金芯片進(jìn)行自組裝修飾,以3-巰基丙酸作為基底膜對(duì)酪氨酸酶進(jìn)行固定,SPR實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)特異性IgY及底物L(fēng)-多巴與酪氨酸酶結(jié)合后芯片表面的響應(yīng)信號(hào)變化。將數(shù)據(jù)導(dǎo)入CLAMP分析軟件,進(jìn)行擬合分析,確定動(dòng)力學(xué)常數(shù)。結(jié)果:酪氨酸酶與特異性IgY的結(jié)合常數(shù)(4.50×106?L/mol)明顯高于其與底物L(fēng)-多巴的結(jié)合常數(shù)(4.95×103?L/mol),且酪氨酸酶與特異性IgY結(jié)合后,其與底物L(fēng)-多巴結(jié)合常數(shù)明顯下降。結(jié)論:相比底物L(fēng)-多巴,酪氨酸酶更易與特異性IgY結(jié)合,而且從結(jié)合動(dòng)力學(xué)角度說(shuō)明特異性IgY可以明顯抑制酪氨酸酶與底物結(jié)合從而抑制酶活性。
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