目的:探討雙齒圍沙蠶抗凝血肽(anticoagulant peptides from Perinereis aibuhitensis,PAAP)的制備及其 抗血栓作用。方法:以抗凝活力為檢測指標,篩選最佳酶對沙蠶進行酶解。酶解產(chǎn)物經(jīng)超濾、陰離子交換層析、 凝膠過濾層析和反相高效液相色譜法分離純化,得到具有最強抗凝活力的沙蠶寡肽,將此肽命名為PAAP并測定 其急性毒性作用。采用角叉菜膠所致的小鼠尾部血栓形成實驗、三氯化鐵所致的大鼠動脈血栓形成實驗及二磷 酸腺苷(adenonisine disphosphate,ADP)誘導(dǎo)的血小板聚集實驗,研究PAAP的抗血栓作用。結(jié)果:選取堿性蛋 白酶作為最佳酶對沙蠶進行酶解,經(jīng)過分離純化后得到一條氨基酸序列:脯氨酸-纈氨酸-谷氨酸-精氨酸-賴氨酸 (Pro-Val-Glu-Arg-Lys)。經(jīng)測定,該寡肽的體外抗凝活力可達(1 320.0±20.3)U/g。PAAP的最大耐受量為 11.0 g/(kg·d)且未出現(xiàn)小鼠異常及死亡現(xiàn)象,體內(nèi)實驗表明PAAP對小鼠尾部血栓的形成、大鼠動脈血栓的形成 及ADP誘導(dǎo)的血小板聚集均有明顯抑制作用。結(jié)論:從雙齒圍沙蠶中提取出的抗凝肽PAAP具有抗血栓作用。
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