采用超聲波輔助水提、乙醇沉淀、DEAE-52陰離子交換層析法從樹蝴蝶(Lobaria koorkauae Yoshim)中分離純化得到多糖LKY-I。采用凝膠滲透色譜法(gel permeation chromatography,GPC)結合葡聚糖凝膠Sephadex G-100分離,測定其分子質量分布及純度;利用傅里葉變換紅外光譜、氣相色譜和核磁共振對其結構進行解析;通過體外清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、2’-聯(lián)氨-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸自由基(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) free radical,ABTS+·)以及對鐵離子還原力(ferric-reducing antioxidant power,F(xiàn)RAP)測定結果,評價LKY-I的抗氧化能力;采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT)測定LKY-I對腫瘤細胞HepG-2、HCC827、MCF-7增殖的抑制作用。結果顯示:LKY-I的總糖含量為88.91%,重均分子質量為61?598?D,是組分均一的多糖,由鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖組成,其物質的量比為1.1∶2.0∶46.5∶28.5∶20.5。傅里葉變換紅外光譜分析結果顯示,LKY-I具有一般多糖類物質的特征吸收峰,單糖殘基以吡喃環(huán)的形式存在。高碘酸氧化、Smith降解以及核磁共振分析表明,LKY-I是含有甘露糖的D-吡喃糖環(huán),包括α和β兩種構型,由24.68%的(1→6)或(1→)連接的糖苷鍵組成。在250~10?000?μg/mL的質量濃度范圍內,隨著多糖質量濃度的升高,LKY-I對DPPH自由基、ABTS+·的清除率逐漸增大,當質量濃度為10?000?μg/mL時,清除率分別達44.12%、24.74%,F(xiàn)RAP值可達0.071?17?mmol/L,與100?μg/mL?VC(0.072?31?mmol/L)相當。在125~2?000?μg/mL范圍內,隨著多糖質量濃度的增加,LKY-I對癌細胞的增殖抑制率逐漸增大。當質量濃度為2?000?μg/mL時,LKY-I對腫瘤細胞HepG-2、HCC827、MCF-7增殖的抑制率達到半抑制濃度,說明樹蝴蝶水洗多糖LKY-I具有一定的抗腫瘤活性。
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