探討蒲公英糖蛋白(glycoprotein from Taraxacum,TG)對(duì)由脂多糖引起的RAW264.7細(xì)胞炎癥的抗炎效 果,并闡明其活性的基本分子機(jī)制。利用脂多糖刺激RAW264.7細(xì)胞,建立體外炎癥模型,采用噻唑藍(lán)比色法檢 測(cè)TG對(duì)RAW264.7細(xì)胞的增殖毒性,Griess試劑法檢測(cè)了一氧化氮(nitric oxide,NO)的分泌情況,反轉(zhuǎn)錄聚合酶 鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)炎癥細(xì)胞因子——白細(xì)胞介素-6(interleukin 6,IL-6)和腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)mRNA以及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA的表達(dá)水平,酶聯(lián)免疫 吸附測(cè)定法測(cè)定IL-6和TNF-α的分泌量,Western blot檢測(cè)P-IκB-α蛋白的表達(dá)水平,用以研究TG對(duì)核轉(zhuǎn)錄因子-κB (nuclear factor-kappa B,NF-κB)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的抑制作用。結(jié)果表明:TG能夠顯著甚至極顯著地抑制NO的分 泌,IL-6、TNF-α、iNOS的mRNA的表達(dá),IL-6和TNF-α的分泌(P<0.05、P<0.01)。TG高度顯著上調(diào)了IκB-α的 蛋白表達(dá)(P<0.001),并顯著下調(diào)了P-IκB-α的蛋白表達(dá)(P<0.05),且與TG質(zhì)量濃度成正比。其中在TG質(zhì)量 濃度為250、500、1 000 μg/mL時(shí)對(duì)TNF-α分泌量的抑制率分別為28.6%、65.4%、89.3%,對(duì)IL-6分泌量的抑制率分 別為32.3%、54.1%、85.7%。TG間接抑制了NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,有顯著的體外抗炎效果且抗炎效果與TG的質(zhì)量 濃度呈劑量依賴性。
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