目的:研究肌原纖維蛋白磷酸化對其被μ-鈣蛋白酶降解的影響。方法:以羊背最長肌肌原纖維蛋白為原料,添加蛋白激酶A和堿性磷酸酶催化磷酸化和去磷酸化反應,反應后加入μ-鈣蛋白酶,通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和熒光染色、蛋白質免疫印跡測定肌原纖維蛋白的磷酸化水平、蛋白降解程度。結果:蛋白激酶A處理組肌原纖維蛋白磷酸化水平顯著高于對照組(P<0.05);堿性磷酸酶處理組肌原纖維蛋白磷酸化水平顯著低于對照組(P<0.05);蛋白激酶A處理抑制μ-鈣蛋白酶自溶,降低其活性,延長其發(fā)揮活性的時間;蛋白激酶A處理促進肌球蛋白重鏈及肌鈣蛋白T降解;堿性磷酸酶處理促進肌動蛋白及肌間線蛋白降解。結論:磷酸化通過作用于μ-鈣蛋白酶活性及肌原纖維蛋白進而影響μ-鈣蛋白酶降解肌原纖維蛋白。
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