以發(fā)根農(nóng)桿菌ACCC10060誘導(dǎo)甜葉菊毛狀根,建立毛狀根培養(yǎng)生產(chǎn)綠原酸類物質(zhì)體系,研究茉莉酸甲酯對(duì)綠原酸類化合物積累的影響。經(jīng)發(fā)根農(nóng)桿菌ACCC10060侵染的甜葉菊葉片外植體,共培養(yǎng)14?d后產(chǎn)生毛狀根。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)結(jié)果表明,發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒的rolB和rolC基因已成功整合到甜葉菊毛狀根基因組中。MS液體培養(yǎng)基較B5、WPM更利于甜葉菊毛狀根生長(zhǎng)及綠原酸類物質(zhì)的積累,培養(yǎng)35?d后,干質(zhì)量增加約30?倍,綠原酸、3,5-二咖啡酰奎寧酸、4,5-二咖啡酰奎寧酸最高含量分別為3.47、11.47、3.04?mg/g。毛狀根在MS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至第3周時(shí)分別添加15、45、100?μmol/L的茉莉酸甲酯進(jìn)行誘導(dǎo),處理后第1、2、4、8天收獲,毛狀根的生長(zhǎng)量和綠原酸類物質(zhì)含量均有提高,其中以45?μmol/L茉莉酸甲酯的促進(jìn)作用最為顯著,3?種綠原酸類物質(zhì)的總產(chǎn)量是對(duì)照組的2.68?倍(P<0.01)。以上結(jié)果表明,甜葉菊毛狀根培養(yǎng)可用于綠原酸類物質(zhì)的生產(chǎn),經(jīng)茉莉酸甲酯處理可顯著提高綠原酸類物質(zhì)的產(chǎn)量。
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