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通用多重不對稱PCR結(jié)合寡核苷酸芯片檢測7 種食源性致病菌
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 214 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 王小強(qiáng),袁 軍,韓銳郡,營思思
關(guān)鍵詞: 食源性致病菌;通用引物;多重不對稱PCR;寡核苷酸芯片
摘要:

應(yīng)用通用多重不對稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)和寡核酸芯片技術(shù)建立一種同時(shí)檢測7 種常見食源性致病菌的方法。每種致病菌上游或下游引物5’端連接一段異源的共有序列。以熒光標(biāo)記的該共有序列作為通用引物,與限制性特異引物經(jīng)一步多重不對稱PCR同時(shí)獲得所有目標(biāo)菌的單鏈標(biāo)記靶序列,可被芯片上固定的特異性寡核苷酸探針捕獲。通過芯片掃描、分析熒光信號完成檢測。標(biāo)準(zhǔn)菌株檢測結(jié)果證實(shí),該方法可特異地檢測單一和混合感染的目標(biāo)菌,基因組DNA的檢測靈敏度為0.1~1 pg。95 份模擬污染和零售食品樣本芯片檢測結(jié)果與常規(guī)的分離與生化鑒定及熒光定量PCR結(jié)果一致。建立的寡核苷酸芯片方法可為快速、特異、靈敏及高通量地鑒定食源性致病菌提供一種有效的檢測手段。

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