將疊氮溴乙錠(ethidium bromide monoazide,EMA)與聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)技術相結合,以酒花耐受基因horC為靶基因,用啤酒腐敗短乳桿菌基因組DNA作為模板進行擴增。結果發(fā)現,在前處理過程中加入EMA,當終質量濃度小于20 μg/mL時,對活的短乳桿菌中靶基因的擴增沒有明顯抑制作用;而當EMA終質量濃度為1.0 μg/mL時可有效抑制105 CFU/mL短乳桿菌死細胞的擴增。本實驗建立的EMA-PCR檢測方法的靈敏度為104 活細胞/mL酒液樣品。驗證實驗結果表明,在13 株乳酸菌中,建立的horC特異性EMA-PCR能有效檢測到其中的全部5 株啤酒污染菌,同時可區(qū)分這5 株菌的活/死細胞混合體系,降低檢測過程中的假陽性。
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