采用中空纖維膜超濾和葡聚糖凝膠層析相結(jié)合的方法對(duì)黑曲霉N5-5單寧酶進(jìn)行純化,然后對(duì)純酶性質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示,黑曲霉N5-5單寧酶用該方法純化后,可純化近20 倍,酶活力可回收23.30%。對(duì)純酶作十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析,可知黑曲霉N5-5單寧酶為分子質(zhì)量64.2 kD的單肽鏈蛋白。純酶的酶促反應(yīng)最適溫度為45 ℃,且在25~45 ℃范圍內(nèi)熱穩(wěn)定性良好;酶促反應(yīng)最適pH值為5.0,且在pH 5.0~5.5范圍內(nèi)酸堿穩(wěn)定性良好。另外,反應(yīng)動(dòng)力學(xué)測(cè)定結(jié)果表明,該酶對(duì)底物沒食子酸丙酯的米氏常數(shù)Km為0.916 mmol/L,最大反應(yīng)速率vmax為0.877 mmol/(L?min)。
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