將低價(jià)肉類原料摻入高價(jià)肉制品是一種典型的肉類摻假方式,為準(zhǔn)確鑒別牛肉及牛肉制品的真?zhèn)危⒁环N基于雙重微滴式數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)的牛源性成分定量分析方法。通過(guò)對(duì)14?種動(dòng)物的Beta-actin單拷貝基因序列進(jìn)行分析,設(shè)計(jì)牛源性特異性引物、探針與動(dòng)物源性成分通用引物、探針并建立雙重ddPCR體系,推導(dǎo)出牛源性成分質(zhì)量與其特異性擴(kuò)增拷貝數(shù)之間的計(jì)算公式,對(duì)牛源性成分進(jìn)行定量檢測(cè)該方法得到牛源性成分質(zhì)量M牛(mg)與其特異性擴(kuò)增拷貝數(shù)濃度C牛(copies/μL)之間的計(jì)算公式為M牛=0.033C牛+2.37,對(duì)已知牛肉質(zhì)量的混合肉樣品與不同部位的牛肉樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示牛肉定量檢測(cè)值與實(shí)際質(zhì)量基本一致。同時(shí)拷貝數(shù)相對(duì)含量可輔助判斷肉制品中是否存在非牛源性的其他動(dòng)物源性成分摻假。對(duì)市售樣品的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),存在目標(biāo)肉樣含量不達(dá)標(biāo)以及不同程度的動(dòng)物源性成分等摻假現(xiàn)象,說(shuō)明該檢測(cè)方法可為牛肉制品摻假量化判定和混合源性產(chǎn)品分級(jí)鑒定提供技術(shù)支撐。
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