建立檢測動物組織中呋喃妥因代謝物的直接競爭化學發(fā)光酶免疫法。采用棋盤法確定抗體和酶標抗原的最佳稀釋度,通過單因素試驗優(yōu)化包被條件、封閉液種類和競爭反應時間,建立直接競爭抑制曲線,并對方法的靈敏度、特異性、準確度和精密度進行方法學評價。結(jié)果表明,經(jīng)優(yōu)化,最佳反應條件為抗體稀釋度1∶4 000,酶標抗原稀釋度1∶80,包被條件為37 ℃ 2 h后4 ℃過夜,封閉液為1%牛血清白蛋白,競爭反應1 h。該方法的線性檢測范圍為0.030~10.595 ng/mL,IC50為0.559 ng/mL;加標回收率為84.9%~103.4%,批內(nèi)變異系數(shù)為3.4%~7.8%,批間變異系數(shù)為4.7%~11.8%;除與呋喃妥因原藥交叉反應率為36.2%,與其他結(jié)構(gòu)類似物及衍生化試劑交叉反應率均小于0.1%。該方法靈敏、準確,可用于動物組織中呋喃妥因代謝物的快速篩查。
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