研究利用重組大腸桿菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET-28a-ldhD全細胞生物轉(zhuǎn)化苯丙酮酸(phenylpyruvic acid,PPA)合成D-苯基乳酸(D-phenyllactic acid,D-PLA)的條件。通過Plackett-Burman試驗設(shè)計,從影響細胞轉(zhuǎn)化的6 種因素中篩選得出轉(zhuǎn)化溫度、底物濃度和磷酸鈉緩沖液pH值對底物PPA摩爾轉(zhuǎn)化率有顯著影響;采用Box-Behnken試驗設(shè)計和響應(yīng)面優(yōu)化,對該重組菌全細胞轉(zhuǎn)化合成D-PLA的條件進行了優(yōu)化。最佳分批轉(zhuǎn)化條件:轉(zhuǎn)化溫度為38 ℃、底物濃度為42 mmol/L、磷酸鈉緩沖液pH 7.0、菌體質(zhì)量濃度20 g/L、葡萄糖質(zhì)量濃度20 g/L。在該條件下反應(yīng)0.5 h,底物摩爾轉(zhuǎn)化率為65.32%。根據(jù)此最佳轉(zhuǎn)化條件,經(jīng)4 h的間歇補加底物轉(zhuǎn)化獲得D-PLA最終濃度為119 mmol/L(19.75 g/L),生產(chǎn)率為4.94 g/(L·h)。
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