本實(shí)驗(yàn)通過(guò)設(shè)計(jì)特異引物序列,對(duì)經(jīng)低溫誘導(dǎo)處理的球等鞭金藻3011的脂肪酸去飽和酶基因片段進(jìn)行篩選,以實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)酶的表達(dá)量,探索低溫對(duì)該多不飽和脂肪酸脫飽和酶基因表達(dá)量的影響。結(jié)果表明:用prime5設(shè)計(jì)包括內(nèi)參基因在內(nèi)的14 條引物,其中7 條引物具有特異性擴(kuò)增,根據(jù)擴(kuò)增效果對(duì)其擴(kuò)增體系進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明:Des4、Des5、Des6、Des8、Des9和Des12 mRNA相對(duì)最大表達(dá)量分別為7.71、11.33、42.58、22.02、73.91和16.01。隨溫度的降低均呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)。根據(jù)SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)分析,6 個(gè)基因在其mRNA相對(duì)表達(dá)量最大的誘導(dǎo)時(shí)間時(shí),18 ℃的mRNA相對(duì)表達(dá)量與其在12、15、21 ℃ 3 個(gè)溫度條件下的相對(duì)表達(dá)量相比具有極顯著差異(P<0.01)。18 ℃條件下誘導(dǎo)24 h可以有效增加Des9基因在球等鞭金藻3011中的表達(dá)。此研究結(jié)果為人為調(diào)控微藻的多不飽和脂肪酸含量提供了一條可行的方法。
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