為制備羊腦蛋白抗氧化肽,本實驗對脫脂羊腦蛋白含量及氨基酸組成進(jìn)行了分析;采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)對枯草芽孢桿菌中性蛋白酶不同酶解時間的酶解液分子質(zhì)量進(jìn)行了分析;采用交聯(lián)葡聚糖凝膠Sephadex G-25和Sephadex G-15對羊腦酶解產(chǎn)物進(jìn)行了逐級分離純化,以羥自由基(·OH)和亞硝酸根離子清除能力為指標(biāo)對分離組分進(jìn)行抗氧活性評價,并對純化后的組分抗氧化活性進(jìn)行了測定。結(jié)果表明,脫脂羊腦粉中蛋白含量為60.55%,在測定的17 種氨基酸中,谷氨酸和天冬氨酸這兩種酸性氨基酸含量最高,且含有7 種必需氨基酸;羊腦蛋白經(jīng)酶解后,分子質(zhì)量集中在10 kD以下;經(jīng)Sephadex G-25純化后,得到了6 個組分,其中組分F4的抗氧化活性最強,組分F4經(jīng)SephadexG-15純化后,得到3 個組分,其中組分F4-2的抗氧化活性最強,組分F4-2對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、·OH、超氧陰離子自由基(O2-·)、亞硝酸根離子的半數(shù)抑制率IC50分別為1.64、2.47、7.98、5.14 mg/mL。
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