對(duì)前期優(yōu)化的堿性蛋白酶最優(yōu)酶解條件下的大豆蛋白抗氧化肽進(jìn)行進(jìn)一步分離、純化及鑒定。采用高效強(qiáng)陰離子交換柱(HiTrap Q HP)、快速弱陰離子交換柱(HiTrap DEAE-FF)和制備液相色譜方法,對(duì)酶解液進(jìn)行分離純化,獲得高純度的抗氧化肽SHP-1。通過(guò)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)測(cè)定抗氧化肽SHP-1的分子質(zhì)量,為741.41 Da;采用氨基酸分析儀對(duì)抗氧化肽SHP-1的組成進(jìn)行分析,表明抗氧化肽SHP-1是由5 種氨基酸組成。通過(guò)LC-MS/MS對(duì)抗氧化肽SHP-1氨基序列進(jìn)行解析并與大豆蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),確定抗氧化肽SHP-1氨基酸序列為IPPGVPY,來(lái)自于大豆球蛋白G4亞基。
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