為探討乳酸鏈球菌素Q13對保加利亞乳桿菌LMG-1(Lactobacillus bulgaricus LMG-1)的抑菌機(jī)理,本研究利用硫酸銨沉淀、超濾和葡聚糖凝膠柱層析等對乳酸乳球菌Q13(Lactococcus lactis Q13)所產(chǎn)細(xì)菌素進(jìn)行分離純化,并運(yùn)用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析其純化效果和分子質(zhì)量,同時(shí)通過研究乳酸鏈球菌素Q13對保加利亞乳桿菌細(xì)胞膜通透性、胞內(nèi)酶活性及菌體形態(tài)結(jié)構(gòu)等的影響,闡明乳酸鏈球菌素對保加利亞乳桿菌的抑菌作用機(jī)制。結(jié)果表明,乳酸乳球菌Q13所產(chǎn)細(xì)菌素硫酸銨沉淀的最適飽和度為60%,硫酸銨沉淀得到粗提物超濾后僅分子質(zhì)量大于10 kDa組分具有抑菌效果,將具有抑菌活性的超濾組分利用葡聚糖凝膠柱層析進(jìn)行純化后,共收集到2 個(gè)具有抑菌活性的洗脫峰,電泳圖譜僅呈現(xiàn)出一條分子質(zhì)量約為17.5 kDa的蛋白條帶,分析其可能為乳酸鏈球菌素的多聚體形式,并將其命名為乳酸鏈球菌素Q13;抑菌機(jī)理實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,乳酸鏈球菌素Q13對保加利亞乳桿菌LMG-1的抑菌機(jī)制主要是通過在靶細(xì)胞細(xì)胞膜上形成孔洞、增加細(xì)胞膜通透性和破壞細(xì)胞膜完整性,導(dǎo)致內(nèi)容物外泄,胞內(nèi)Na+/K+-ATP酶和堿性磷酸酶等關(guān)鍵酶含量降低,影響細(xì)胞正常能量代謝活動(dòng),最終誘導(dǎo)菌體細(xì)胞死亡。
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